Protein homogeneity testing by reversed-phase high-performance liquid chromatography of reduced and non-reduced samples

P. Minkiewicz; J. Dziuba; M. Niklewicz

Data publikacji : 2022-09-01

Tom 50 Nr 5 (2005)

Testowanie homogeniczności białek przy użyciu wysokosprawnej chromatografii cieczowej z odwróconymi fazami redukowanych i nieredukowanych próbek

P. Minkiewicz J. Dziuba M. Niklewicz

Abstrakt

Wzorce białek izolowane tą samą metodą mogą wykazać heterogeniczność. Założono, że brak homogeniczności może być wyjaśniony występującymi różnicami w położeniu wiązań disiarczkowych. Dwie partie bydlęcej laktoalbuminy-a zostały poddane analizie przy pomocy wysokosprawnej chromatografii cieczowej z odwróconymi fazami (RP-HPLC). Jedna z partii była homogeniczna, a druga tworzyła dwie frakcje, jeśli przed analizą nie była zredukowana (rys. 1). Zarówno RP-HPLC jak i spektrometria mas nie wykazały różnicy między próbkami pochodzącymi z różnych partii, ale uprzednio zredukowanymi (rys. 1. i 2.). Wynik ten wskazuje, iż jedna z partii białka zawierała izomery różniące się położeniem wiązań disiarczkowych. Na podstawie niniejszego eksperymentu można polecić porównanie chromatogramów białka niezredukowanego oraz zredukowanego jako test służący badaniu homogeniczności wzorców białek. Test taki byłby szczególnie przydatny w przypadku próbek białek przeznaczonych do badań procesów denaturacji.

Słowa kluczowe

wiązania disiarczkowe ; laktoalbumina-a ; heterogeniczność wzorców białek ; wysokosprawna chromatografia cieczowa z odwróconymi fazami disulphide bonds ; a-lactalbumin ; protein standard heterogeneity ; reversed-phase high-performance liquid chromatography

Szczegóły

Bibliografia

Wskaźniki

Autorzy

Pobierz pliki

PDF (English)

Zasady cytowania

Minkiewicz, P., Dziuba, J., & Niklewicz, M. (2022). Testowanie homogeniczności białek przy użyciu wysokosprawnej chromatografii cieczowej z odwróconymi fazami redukowanych i nieredukowanych próbek. Polimery, 50(5), 379-382. Pobrano z https://ichp.vot.pl/index.php/p/article/view/1644

Bibliografia

Dadlez M.: Acta Biochim. Polon. 1997, 44, 433.

2. Wedemeyer W. J., Welker E., Narayan M., Scheraga H. A.: Biochemistry 2000, 39, 4207.

3. Croguennec T., Bouhallab S., Mollé D., O‘Kennedy B. T., Mehra R.: Biochem. Biophys. Res. Commun. 2003, 301, 465.

4. Croguennec T., Mollé D., Mehra A., Bouhallab S.: Protein Sci. 2004, 13, 1340.

5. Dutton J. L., Bansal P. S., Hogg R. C., Adams D. J., Alewood P. F., Craik D. J.: J. Biol. Chem. 2002, 277, 48849.

6. Chang J.-Y., Bulychev A., Li L.: FEBS Lett. 2000, 487, 298.

7. Chang J.-Y., Li L.: J. Biol. Chem. 2001, 276, 9705.

8. SWISS-PROT database is available at the website:
Crossref

9. Uversky V. N.: Cell. Mol. Life Sci. 2003, 60, 1852.

10. Farrell H. M. Jr, Jimenez-Flores R., Bleck G. T., Brown E. M., Butler J. E., Creamer L. K., Hicks C. L., Hollar C. M., Ng-Kwai-Hang K. F., Swaisgood H. E.: J. Dairy Sci. 2004, 87, 1641.

11. de la Fuente M. A., Singh H., Hemar Y.: Trends Food Sci. Technol. 2002, 13, 262.

12. Brodbeck U., Denton W. L., Tanahashi N., Ebner K. E.: J. Biol. Chem. 1967, 242, 1391.

13. Visser S. , Slangen C. J., Rollema H. S.: J. Chromatogr. 1991, 548, 361.

14. Karas M., Hillenkamp F.: Anal. Chem. 1988, 60, 2299.

15. Flensburg J., Haid D., Blomberg J., Bielawski J., Ivansson D.: J. Biochem. Biophys. Methods 2004, 60, 319.

16. Slangen C. J., Visser S.: J. Agric. Food Chem. 1999, 47, 4549.

17. Hau J., Bovetto L.: J. Chromatogr. A 2001, 926, 105.

18. Chang J. -Y.: J. Biol. Chem. 1995, 270, 25 661.

19. Chang J. -Y.: Anal. Biochem. 1999, 268, 147.

20. Singh R. R., Chang J.-Y.: Biochim. Biophys. Acta 2003, 1651, 85.

21. Li L., Chang J.-Y.: Protein J. 2004, 23, 3.

Google Scholar

Cytowania w Google Scholar

Statystyki

Total abstract views : 41

PDF Downloads : 22

P. Minkiewicz

Afiliacja
University of Warmia and Mazury in Olsztyn, Chair of Food Biochemistry, Plac Cieszyński 1, 10-726 Olsztyn Kortowo, Poland

J. Dziuba jerzy.dziuba@uwm.edu.pl

Afiliacja
University of Warmia and Mazury in Olsztyn, Chair of Food Biochemistry, Plac Cieszyński 1, 10-726 Olsztyn Kortowo, Poland

M. Niklewicz

Afiliacja
University of Warmia and Mazury in Olsztyn, Chair of Food Biochemistry, Plac Cieszyński 1, 10-726 Olsztyn Kortowo, Poland